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发布时间:2022-09-07 23:50:00 作者:品成化妆品工厂
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外泌体的发现在是1983年,由加拿大麦吉尔大学生物化学系Rose M. Johnstone研究小组在体外培养的绵羊红细胞上清液中发现的,在当时该研究小组只是认为这是一种有膜结构的细胞小囊泡,并且觉得这种小囊泡能够把细胞生长发育过程中不必要的蛋白质从一个细胞携带至另一个细胞,这样就很快被断定小囊泡是细胞代谢的“垃圾”。但随着研究的不断深入,在1987年的时候Johnstone研究小组再次把小囊泡命名为“exosomes”外泌体。一直到2013年,经过近30年的不断深入探索,外泌体在细胞间运输调控的机制被再进一步深入挖掘,也因此美国科学家(James E. Rothman、Randy W. Schekman)和德国科学家(Thomas C. Südho)共同获得2013年诺贝尔生理医学奖。
外泌体是细胞分泌的胞外囊泡的一种,它的主要成分是磷脂双分子层和携带相关内容物,所以并非是所有的细胞分泌出来的囊泡都可称之为外泌体。现在普遍是采用离心法去提取外泌体,将细胞培养上清液通过0.22um孔径大小的过滤器,接着再进行下一步的离心,之所以采用这个方法的原因是可以减少外泌体制剂的污染,并且同时能够使其中较大的囊泡从滤液中有效分离。外泌体的提取可以从多种体液中提取出来,如人的血液、尿液、和唾液等地方提取,也可以通过从多种细胞培养上清液中提取。
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如何分离外泌体?
我们可以通过不同的分离方法从生物体液中进行外泌体分离,下面选取几种方法分别做介绍:
差速离心:差速离心是大家熟悉的一种分离方法,文献中用得多的且也是目前比较能受到认可的方法。差速离心是先通过低速离心去除细胞和细胞凋亡碎片,再通过超高速去除大囊泡和沉淀外泌体。此方法分离得到的外泌体可用于后续的鉴定实验、分子检测实验、细胞实验和动物实验。
密度梯度离心:此方法多指蔗糖密度梯度离心。此方法从不同密度的颗粒中分离出囊泡,对离心的时间比较敏感。如果外泌体和颗粒密度相似,外泌体可能会被其他颗粒污染。
超滤:超滤过程中需要用超滤膜进行外泌体隔离。在分离过程中,外泌体可能会阻塞过滤孔,导致膜的寿命减短,分离效率较低。同时,外泌体会粘附在膜上,导致产量降低。
磁珠法:用包被抗标记物的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。该方法分离得到的外泌体的生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验。
试剂盒分离法:目前商业化的外泌体提取试剂盒多种多样,提取效果良莠不齐。同时试剂盒本身的价格比较高,且外泌体的得率和纯度一般,不是高的一种分离方法。此方法得到的外泌体对于后续的鉴定实验、细胞实验和动物实验等可能有影响。
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外泌体实际上就指的是包括了很多繁杂的RNA和蛋白的小膜泡。用简单一点得话来讲便是体细胞代谢的化学物质,外泌体实际上早在二十世纪八十年代就早已被看到了,可是在历经了接近40很多年的科学研究,才真真正正被广泛运用,目前或是归属于一种发展趋势环节.
可是由于拥有十分明显的成果,因此也是被不停的研发运用着。外泌体的使用价值自打被分析出去就十分的受高度重视,在学层面,不但受学临床医学,乃至也有身体之外检验这些方面的用来开展运用。
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